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        動物基因組DNA提取試劑盒
        • 產品貨號:
          BN12051
        • 中文名稱:
          動物基因組DNA提取試劑盒
        • 英文名稱:
          Animal DNA Extraction Kit
        • 品牌:
          Biorigin
        • 貨號

          產品規格

          售價

          備注

        • BN12051-50T

          50T

          ¥450.00

        產品描述

        保存條件 

              常溫(10~25℃)保存 12 個月,其中 Proteinase K 保存條件 -20℃。 

        產品簡介 

              本試劑盒可從≤25 mg 新鮮或冷凍的動物組織(比如鼠尾、鼠趾、肝臟等)、血液、細胞中快速提取基 因組 DNA。 試劑盒采用優化的緩沖體系,使裂解液中的DNA高效特異地結合到硅基質吸附柱上。提 取過程無需使用苯酚或氯仿等有毒溶劑,得到的 DNA 濃度和純度高,可直接用于酶切、PCR、文庫構建、 Southern Blot、分子標記等下游實驗。 

        產品特點 

           ? DNA質量高:提取的DNA濃度和純度較高,適用于對濃度、純度和完整性要求較高的下游實驗;

           ? 安全低毒:無需酚、氯仿等有毒試劑。

        適用范圍 

               本品適用于冷凍或新鮮動物組織樣本、新鮮血液、細胞樣本的基因組DNA提取。

        注意事項 

           1. 第一次使用前,按瓶上標簽要求在 Buffer GW1 和 Buffer GW2 中加入相應體積的無水乙醇;

           2. 使用前請檢查 Buffer GA1 和 Buffer GA2 是否出現沉淀,如有請于 37?C 水浴溶解后使用; 

           3. 若下游實驗受 RNA 影響較大,可在步驟 2 結束后按照要求加入 RNase A(目錄號: BN20386);

           4. 為保證基因組 DNA 得率及完整性,樣品請勿反復凍融; 5. 所有離心操作均在室溫下進行。

        使用方法 

           1) 血液及細胞樣本: 

           1. 樣本處理

           a. 哺乳動物抗凝血液(無核紅細胞):直接向 50~200 μL 新鮮或冷凍的抗凝血液樣品中加入 Buffer GA1 補足至 200 μL; 

           b. 禽類,鳥類,兩棲類或更低級生物的抗凝血液:其紅細胞為有核細胞,取 5~20 μL 新鮮或冷凍的 抗凝血液樣品,加入 Buffer GA1 補足至 200 μL; 

           c. 貼壁培養的細胞:應先處理為細胞懸液(最大提取量為 5×106個細胞),10,000 rpm(~11,200× g)離心 1 min,棄盡上清,加 200 μL Buffer GA1,振蕩至樣品徹底懸浮; 

        注意:如需去除 RNA,可在上述步驟完成后,加入 4 μL 濃度為 100 mg/mL 的 RNase A 溶液(目錄號: BN20386),渦旋 15 s,室溫放置 5 min。 

           2. 加入 20 μL Proteinase K 溶液,混勻后加入 200 μL Buffer GA2,渦旋振蕩充分混勻,70?C 水浴 10 min; 

           3. 短暫離心以去除管蓋內壁的水珠。加入 200 μL 無水乙醇,渦旋振蕩充分混勻,短暫離心,進入步驟 4 過柱純化;

           2)動物組織樣本: 

           1. 樣本處理:正確的組織取樣量是獲得理想產量和純度的關鍵。初次使用時,推薦動物組織量為 10~15 mg, 根據實驗過程及結果再調整用量。樣品可用液氮研磨,或機械/玻璃勻漿器等工具 進行勻漿。

           a. 針對普通動物組織、內臟組織等易于研磨的樣本: 

           液氮研磨:將研磨后的樣品置于 1.5 mL 離心管中,加入 200 μL Buffer GA1; 

           勻漿器勻漿:勻漿前向樣本中加入≤80 μL Buffer GA1 進行勻漿,勻漿后再加入120 μL Buffer GA1; 

           b. 針對鼠尾等含較硬組織的樣本(過夜消化 6~8 h):將組織樣品直接置于 1.5 mL 離心管中,加入 200 μL Buffer GA1; 

        注意:確保各組織的量不超出推薦范圍。樣品量過多可能導致裂解不充分,導致裂解液粘稠堵塞吸附柱, 可能造成提取失敗或得率低。 

           2. 加入 20 μL Proteinase K (20 mg/mL),渦旋振蕩徹底混勻。普通動物組織 56?C 水浴充分裂解 1~3 h(鼠尾等較硬樣本需過夜消化 6~8 h),期間可數次顛倒或振蕩使樣品分散。如需去除 RNA, 可在此步驟完成后,加 入 4 μL 濃度為 100 mg/mL 的 RNase A 溶液(目錄號:BN20386),渦 旋振蕩 15 s,室溫放置 5~10 min; 

        注意:若渦旋振蕩或孵育后仍有膠狀物,可再次加入 20 μL Proteinase K 后孵育或延長孵育時間。

           3. 加入 200 μL Buffer GA2,渦旋振蕩充分混勻,70?C 水浴 10 min。短暫離心后加入 200 μL 無水乙 醇, 立即渦旋振蕩充分混勻(此步驟可能會產生白色沉淀,不影響后續實驗,某些組織如脾、肺,可 能形成溶膠狀產物,此時推薦進行劇烈振蕩或渦旋處理),進入步驟 4 過柱純化; 

        過柱純化: 

           4. 短暫離心,將步驟 3 所得溶液和絮狀沉淀全部加入吸附柱中(吸附柱放入收集管中),12,000 rpm(~13,400 ×g)離心 30 s,倒掉收集管中廢液,將吸附柱重新放回收集管中,若一次不能加 完溶液,可分多次轉入; 

           5. 向吸附柱中加入500 μL Buffer GW1(使用前檢查是否已加入無水乙醇),12,000 rpm(~13,400 ×g)離心 30 s,倒掉收集管中廢液,將吸附柱重新放回收集管中; 

           6. 向吸附柱中加入600 μL Buffer GW2(使用前檢查是否已加入無水乙醇),12,000 rpm(~13,400 ×g)離心 30 s,倒掉收集管中廢液,將吸附柱重新放回收集管中; 

           7. 重復步驟 6 ; 

           8. 12,000 rpm(~13,400×g)離心 2 min,開蓋室溫晾干數分鐘;

        注意:此步為去除殘余漂洗液,不可省略。 

           9. 將吸附柱置于新的離心管(自備)中, 向吸附膜中間部位懸空滴加 50~200 μL Buffer TE 或 ddH2O,室溫放置 2~5 min,12,000 rpm(~13,400 ×g)離心 2 min,收集 DNA 溶液,-20℃ 保存 DNA。

        注意:

           1) 若需增加產量,可將得到的溶液重新加入到吸附柱中,室溫放置 2~5 min,12,000 rpm(~13,400×g) 離心 2 min; 

           2) 如果下游實驗對 pH 值或 EDTA 敏感,可以用滅菌水洗脫。洗脫液的 pH 值對洗脫效率有較大影響, 若用水作洗脫液應保證其 pH 值在 7.0~8.5(可以用 NaOH 將水的 pH 值調到此范圍),如需長 期保存,推薦用 Buffer TE 洗脫并于 -20°C 保存。 

        常見問題與解決辦法 

           Q1:柱子堵塞? 

           A1: 

           1) 樣品用量過多。建議按照說明書推薦量進行提取,尤其是富含 DNA 的組織需注意減少用量; 

           2) 樣品未充分裂解或研磨。充分裂解或研磨樣品,鼠尾組織建議過夜消化;

           3) 離心溫度過低。本產品使用操作均在室溫下進行。 

           Q2:DNA 得率低? 

           A2: 

           1) 樣品裂解不充分。若樣品過量則適當減少樣品量,延長56?C孵育時間,或在步驟 2 中再加入 20 μL Proteinase K(20 mg/mL)消化;

           2) 樣品用量過少。建議按照說明書推薦量進行提取;

           3) 樣品材料質量不好。盡量選用新鮮組織樣品,樣品采集后應液氮速凍,然后置于-80℃保存,建議盡快提取,避免反復凍融。 

           Q3:后期實驗受 RNA 影響? 

           A3: 

           1) 未加入 RNase A 消化。若后續實驗需要去除 RNA 影響, 可按照說明書步驟加入 RNase A 消化; 

           2) 樣品中RNA含量過多。可適當增加 RNase A 用量或延長消化時間。

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